நியூக்ளிக் அமிலத் தொகுப்பின் கோட்பாடுகள்

நியூக்ளிக் அமிலத் தொகுப்பு திட நிலை சியாலிக் அமைடு ட்ரைகிளிசரைடு முறையைப் பயன்படுத்தி மேற்கொள்ளப்படுகிறது, இதன் மூலம் டிஎன்ஏவின் 3′ முடிவு ஒரு திடமான கட்ட அடி மூலக்கூறில் அசையாது மற்றும் நியூக்ளியோடைடுகள் 3′ முதல் 5′ திசையில் தேவையான டிஎன்ஏ துண்டு ஒருங்கிணைக்கப்படும் வரை சேர்க்கப்படும். .டிஎன்ஏ பாலிமரேஸின் பயன்பாட்டின் மூலம் டிஎன்ஏ தொகுப்பிலிருந்து இது வேறுபடுகிறது.

தொகுப்பின் போது முதல் தளத்தின் 3′ முடிவு CPG இல் அசையாது, அடுத்த தளத்தின் 5′-OH ஆனது di-p-tolyl trityl DMT உடன் பாதுகாக்கப்படுகிறது, அடித்தளத்தில் உள்ள அமினோ குழு பென்சாயிக் அமிலம் மற்றும் 3′ மூலம் பாதுகாக்கப்படுகிறது. -OH பின்னர் ஒரு அமினோ பாஸ்பேட் கலவை மூலம் செயல்படுத்தப்படுகிறது.1 தளத்தின் 5 5′-OH இன் 1 அடிப்படையும், அடுத்த அடிப்பகுதியின் 3′-OH இன் 1 அடிப்படையும் ஒரு பாஸ்பைட் ட்ரைகிளிசரைடை உருவாக்குகின்றன, இது அயோடினுடன் பாஸ்பேட் ட்ரைகிளிசரைடாக ஆக்சிஜனேற்றம் செய்யப்படுகிறது, இரண்டாவது அடிப்படை 5′-OH இல் உள்ள பாதுகாவலன் அகற்றப்படுகிறது. அடுத்த தளத்தைச் சேர்ப்பதன் மூலம் டிக்ளோரோஅசெட்டிக் அமிலம் DM சுழற்சிகளைச் சேர்த்தல், மற்றும் தொகுப்புக்குப் பிறகு 5′-OH இல் உள்ள பாதுகாவலானது பலவீனமான அமிலத்துடன் அகற்றப்படும். செறிவூட்டப்பட்ட அம்மோனியம் ஹைட்ராக்சைடு வெப்பத்தின் கீழ், அம்மோனியம் ஹைட்ராக்சைடு அகற்றப்பட்டு, துண்டு வெற்றிடமாக உலர்த்தப்பட்டு, நியூக்ளிக் அமிலம் திரவ நிறமூர்த்தம் அல்லது PAGE மூலம் சுத்திகரிக்கப்படுகிறது.

ஒலிகோ தொகுப்பின் படிகள்

தடுக்கிறது

திடிசிஏ தீர்வைச் சேர்ப்பதன் மூலம் 5 முடிவு டிஎம்டி பாதுகாக்கும் குழு அகற்றப்பட்டது.

செயல்படுத்துதல்

ஆக்டிவேட்டரை ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு மோனோமருடன் கலந்து செயலில் உள்ள ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு மோனோமர் இடைநிலையை உருவாக்குகிறது.

இணைத்தல்

5-டெர்மினல் ஹைட்ராக்சைல் குழுவானது செயலில் உள்ள ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு இடைநிலையுடன் வினைபுரிந்து ஒரு நிலையற்ற பாஸ்பைட் ட்ரைகிளிசரைடு பிணைப்பை உருவாக்குவதற்கு எதிர்ப்பு மின்தேக்கி வினையில் செயல்படுகிறது.

கேப்பிங் 

ஒரு கேப்பிங் ஏஜென்ட் சேர்ப்பது, ஒடுக்க வினையில் ஈடுபடாத அதிகப்படியான ஹைட்ராக்சில் குழுக்களுடன் அசிடைலேஷன் கேப்பிங் வினையைச் செய்கிறது.

ஆக்சிஜனேற்றம் 

தண்ணீரைக் கொண்ட அயோடின் கரைசலைச் சேர்ப்பது ஆக்சிஜனேற்றம் மூலம் நிலையற்ற பாஸ்பைட் பிணைப்புகளுடன் வினைபுரிந்து நிலையான பாஸ்போரிக் அமில ட்ரைகிளிசரைடு பிணைப்புகளை உருவாக்குகிறது.

சயனோஎத்தில் பிளவு

பாஸ்பேட் ட்ரைகிளிசரைடு பிணைப்பிலிருந்து சயனோஎத்தில் குழுவை அகற்றுவதற்கு DEA கரைசலுடன், தொகுப்புக்குப் பிறகு நியூக்ளிக் அமில தயாரிப்பு.

பிளவு & துடைத்தல்

நியூக்ளிக் அமிலத் துண்டுகள் ஒரு செறிவூட்டப்பட்ட அம்மோனியம் ஹைட்ராக்சைடு கரைசலைச் சேர்ப்பதன் மூலம் திட நிலை கேரியரில் இருந்து பிளவுபடுத்தப்பட்டு, பின்னர் அடித்தளங்களின் ஹைட்ரஜன் பிணைப்புகளிலிருந்து பாதுகாக்கும் குழுக்களை அகற்ற சூடேற்றப்படுகின்றன.